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巴恩斯迷宫视频分析系统对缺血性脑卒中大鼠行为学的影响

日期:2019-11-13 13:00
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摘要: 摘要:目的探讨“醒脑开窍”针刺法对缺血性脑卒中大鼠行为学影响,为针刺**缺血性脑卒中提供理论依 据。方法将80只SD大鼠随机分为电针组、电针对照组、模型组、假手术组,每组20只。采用热凝闭法制造大鼠大 脑中动脉闭塞模型。电针刺激在造模成功24 h内进行,采取“醒脑开窍”法,电针组取穴水沟、百会和双侧内关、三阴 交,电针30 min/次,1次/d,每7 d为1疗程(连续针刺6 d,后休息1 d),共14 d。余各组抓取、固定方法参数等同 电针组,但不针刺。各组的大鼠在7 d、4 d随机各取10只进行神经功能评估、Barnes记忆分析及滚筒掉落时间...

摘要:目的探讨“醒脑开窍”针刺法对缺血性脑卒中大鼠行为学影响,为针刺**缺血性脑卒中提供理论依 据。方法将80只SD大鼠随机分为电针组、电针对照组、模型组、假手术组,每组20只。采用热凝闭法制造大鼠大 脑中动脉闭塞模型。电针刺激在造模成功24 h内进行,采取“醒脑开窍”法,电针组取穴水沟、百会和双侧内关、三阴 交,电针30 min/次,1次/d,每7 d为1疗程(连续针刺6 d,后休息1 d),共14 d。余各组抓取、固定方法参数等同 电针组,但不针刺。各组的大鼠在7 d、4 d随机各取10只进行神经功能评估、Barnes记忆分析及滚筒掉落时间观 察记忆及运动功能。结果电针后,Barnes记忆持续时间较模型组显著延长CP<0.001),进入隐藏区的潜伏期较模型 组显著缩短CP<0.001),滚筒掉落时间较模型组明显延长CP<0.001)。结论“醒脑开窍”针刺的方法能改善缺血性脑 卒中大鼠记忆、运动功能等行为学。Barnes记忆分析系统及滚筒掉落时间可客观地反映大鼠记忆及运动功能的变 化,对于电针对大鼠行为学实验研宄有重要意义。

脑血管**是威胁人类健康的重大**之一,包 括缺血性和出血性两类[1]。缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease,ICVD)在老年人中具有高发 病率、患病率、致残率和死亡率,且发病逐渐年轻化。 加大脑血管病防治力度,改善预后,预防并发症,提高 脑血管**的疗效是一项刻不容缓的重任。目前,虽 然对ICVD的**取得了较大的进步,在溶栓和(或) 取栓同时,也可使用神经保护剂来避免或减少再灌 注损伤,但仍无一种神经保护的**可使患者从中 获益[2],研究表明电针在ICVD中的应用中能促进其 功能恢复[3],己是缺血性脑血管病的常规治法。本实 验主要通过电针来干预脑缺血大鼠模型,为针刺** ICVD提供实验研究依据。

1材料

1.1实验动物选择18月龄,雄性,体质量200〜250 g的SD大鼠80只,均购买并饲养于安徽中医 药大学实验动物中心,预适应1周后方开始实验。 大鼠选用清洁级颗粒饲料喂养,并予自由饮食及饮 水,视垫料清洁的程度更换垫料。饲料和垫料均购买于安徽中医药大学实验动物中心,饲养环境模拟 标准日夜系统。


1.2实验仪器G6805型电针**仪:苏州医疗用 品厂幸运飞艇;电凝器;牙科钻;华佗牌一次性针灸 针:苏州,规格为直径0.2 mm,针身长0.5寸;Barnes 迷宫测试板、圆形滚筒:上海欣软XR-XB108型巴恩斯迷宫视频分析系统。

2实验方法

2.1实验分组80只SD大鼠随机分为假手术组(该组只行血管分离)、模型组、电针对照组、电针组, 每组20只。

2.2大脑中动脉闭塞大鼠模型的建立及成功与否检测的方法在室温25 °C条件下,SD大鼠称重后,根 据罗燕等[4]提出的热凝闭大脑中动脉法制造局灶性 脑缺血大鼠模型:将SD大鼠右侧卧位固定于手术台 上,去除左侧颞顶部的鼠毛,碘伏对颞顶部局部皮肤 **。左眼与左耳之间切开皮肤,钝性分离颞肌,暴露 出颞骨翼板,术中避免损伤周围血管及神经等。用牙 科钻经颞骨翼板钻至硬脑膜,用小咬骨钳向下咬去部分颅骨,暴露大脑中动脉,用电凝器来凝闭大脑中动 脉(嗅束到大脑下静脉),后缝合颞肌及皮肤。

假手术组:同上操作到暴露大脑中动脉,不进行 热凝闭。大鼠苏醒后参照Zea Longa E等提出的神经行 为学评估法进行评分,评分1~3分表示造模成功,采 用差额补充的方法保证每组实验的例数。

2.3处理方法电针组:造模成功后将不予麻醉的 大鼠固定在自制鼠夹上。根据华兴邦等[6]制定的大 鼠针灸穴位进行定位,选用“醒脑开窍”针刺法,主 穴取水沟、百会和双侧内关、三阴交。先用捻转、提插 泻法刺激双侧内关1 mm至筋间,刺激1 min,留针 30 min;次用雀啄法由鼻中隔下部向上斜刺水沟1 mm,强刺激1 min;再应用提插法直刺三阴交5 mm, 持续1 min;*后刺百会穴,取向前或向后斜刺2 mm,采用平补平泻捻转手法刺激1 min,留针30 min。留针期间,分别用G6805电针**仪连接内关 和三阴交穴位的针柄,施以疏密波,调整电压为2~4 V,频率为2/100 Hz,以针刺部位轻微抖动为刺激强 度。第1次针刺在造模成功后的24 h内进行,以后每 天上午固定时间针刺1次,每7 d为1个疗程(连续 针刺6 d,休息1 d)[8。

电针对照组:SD大鼠不进行任何手术,抓取、固 定方法、针刺穴位、方法、频率、电针刺激参数等同电 针**组。

假手术组、模型组:抓取、固定方法参数等同电针 组,但不进行针刺。

2.4观察指标

2.4.1大鼠神经行为学评分[5] 0分:无神经缺损症状;1分:将大鼠提尾倒悬时,左侧前爪不能完全伸 展;2分:爬行时左侧转圈;3分:行走困难、向左侧倾 倒;4分:不能自发行走,意识丧失。

2.4.2 Barnes记忆分析系统检测训练过程:将大鼠 逐只放在圆形漆黑Barnes迷宫测试板上,测试板的 周围有20个洞口,底部放置底盒的一个洞口称之为 隐藏区,其余称之为暴露区,每次训练开始时将大鼠 放置于隐藏区,让其适应30 s,然后将其放在迷宫中 央,自由选择进入隐藏区,每次训练240 s,每只老鼠 做完以后都用酒精对迷宫进行擦拭。每天下午每只大 鼠连续训练2次,连续训练6 d。

测试过程:第1 d训练结束后按分组测试,然后 连续训练6 d后第7 d开始测试,按分组开始测试, 测试过程同训练过程,每只测试2次,Barnes迷宫反映了动物的空间记忆功能。


2.4.3滚筒掉落时间检测选用直径20 cm圆形滚 筒,设定转速为5转/min,测试时间为5 min,按照分 组将大鼠放在滚筒中,倾斜60。,每次可测试3只大 鼠,每只测试3次,记录大鼠掉落平台时间,*长测试 时间为 5 min。

2。5统计学方法所有计量资料均用均数±标准 差(X± s)表示,Barnes记忆持续时间、大鼠进入隐藏 区的次数、进入的潜伏期以及滚筒掉落时间等参数 的比较采用单因素方差分析。统计结果,均由SPSS for windows 19。0自动运算完成。P<0。01为有显著统 计学意义,P<0。05为有统计学意义,P>0。05为无统 计学意义。





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